溴化乙錠是一種高度靈敏的熒光染色劑,用于觀察瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠中DNA。溴化乙錠用標準302nm 紫外光透射儀激發并放射出橙紅色信號,觀察瓊脂糖凝膠中DNA*常用的方法是利用熒光染料溴化乙錠進行染色,溴化乙錠含有一個可以嵌入DNA堆積堿基之間的一個三環平面基團。它與DNA的結合幾乎沒有堿基序列特異性。在高離子強度的飽和溶液中,大約每2.5個堿基插入一個溴化乙錠分子。當染料分子插入后,其平面基團與螺旋的軸線垂直并通過范德華力與上下堿基相互用。這個基團的固定位置及其與堿基的密切接近,導致與DNA結合的染料呈現熒光,其熒光產率比游離溶液中染料有所增加。DNA吸收254nm處的紫外輻射并傳遞給染料,而被結合的染料本身吸收302nm和366nm的光輻射。這兩種情況下,被吸收的能量在可見光譜紅橙區的590nm處重新發射出來。由于溴化乙錠-DNA復合物的熒光產率比沒有結合DNA的染料高出20-30倍,所以當凝膠中含有游離的溴化乙錠(0.5ug/ml)時,可以檢測到少至10ng的NDA條帶。溴化乙錠可以嵌入堿基分子中,導致錯配。
溴化乙錠是強誘變劑,具有高致癌性!會在60-70度是蒸發(所以*好不要在膠太熱的時候加,或者應該加到液體里,0.5ug/ml,染色半小時)(當EB加得過多時,也可以在室溫用水將已染色的凝膠浸泡20min以降低未結合的EB引起的背景熒光)。
DEPC即二乙基焦碳酸酯(diethylprocarbonate),可滅活各種蛋白質,是RNA酶的強抑制劑。DEPC是一種潛在的致癌物質,在操作中應盡量在通風的條件下進行,并避免接觸皮膚。DEPC毒性并不是很強,但吸入的毒性是*強的,使用時戴口罩。不小心占到手上注意立即沖洗,RNase AwayTM試劑可以替代DEPC,操作簡單,價格低,且無毒性。只需將RNaseAwayTM直接倒在玻璃器皿和塑料器皿的表面,浸泡后用水沖洗去除,即可以快速去除器皿表面的RNase,并且不會殘留而干擾后繼實驗。
9. 氯仿(CHCl3)對皮膚、眼睛、黏膜和呼吸道有刺激作用。它是一種致癌劑,可損害肝和腎。它也易揮發,避免吸入揮發的氣體。操作時戴合適的手套和**眼鏡并始終在化學通風櫥里進行。
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